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THP-1細(xì)胞培養(yǎng)建議

一、細(xì)胞概述

THP-1細(xì)胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系。它來(lái)自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。

THP-1  細(xì)胞的特點(diǎn)

  喜歡酸性環(huán)境

在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長(zhǎng)更快，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時(shí)，是適合細(xì)胞生長(zhǎng)的，此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可。

 有密度依賴性

THP-1細(xì)胞密度低時(shí)，生長(zhǎng)較慢，培養(yǎng)密度維持在50萬(wàn)-100萬(wàn)細(xì)胞/毫升為宜；超過(guò)200萬(wàn)/毫升則需要傳代。

二、細(xì)胞培養(yǎng)條件

三、細(xì)胞培養(yǎng)建議

1、細(xì)胞復(fù)蘇：將凍存管從液氮中取出后迅速放入37℃水浴鍋中搖晃解凍，準(zhǔn)備15ml離心管，將完全培養(yǎng)基移取6ml與細(xì)胞混合均勻，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，再加入6ml完全培養(yǎng)基吹勻后重復(fù)離心3min，棄去上清液，補(bǔ)加6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）過(guò)夜，第二天檢查細(xì)胞密度。

2、細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約8x10^5cells/ml左右時(shí)，即可進(jìn)行傳代。由于是懸浮細(xì)胞，可直接將細(xì)胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應(yīng)少于1x10^5 cells/ml。如果用肉眼觀察則將培養(yǎng)瓶平放靜置后觀察鏡下細(xì)胞密度達(dá)到80%，即可進(jìn)行傳代。

3、細(xì)胞凍存：50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 配置細(xì)胞凍存液或使用Biochannel細(xì)胞凍存液（，將培養(yǎng)瓶中細(xì)胞懸液抽出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液。按照需求將配置好的細(xì)胞凍存液加入離心管中吹勻細(xì)胞，再分裝凍存管中置于程序降溫盒中在-80℃冰箱中過(guò)夜，次日放入液氮中保存。

四、BioChannel 血清培養(yǎng)效果

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五、THP-1培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

Q: 培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%，說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

Q: 培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？

A: 少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過(guò)20%）有助于解決聚團(tuán)問(wèn)題。不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，會(huì)自己分散開(kāi)。

Q: 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A: β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過(guò)大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。

Q: 鏡下觀察時(shí)，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A: 懸浮細(xì)胞會(huì)隨著液體流動(dòng)，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細(xì)胞沉底，之后再輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度。