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如何應(yīng)對(duì)細(xì)胞復(fù)蘇不貼壁問(wèn)題

凍存的細(xì)胞總是受損？復(fù)蘇的細(xì)胞存活率低？什么時(shí)候適合凍存細(xì)胞？復(fù)蘇細(xì)胞有什么要注意的？應(yīng)對(duì)細(xì)胞復(fù)蘇問(wèn)題我們有妙招！

很多科研人會(huì)遇到細(xì)胞雖然是活細(xì)胞但是不貼壁的情況，這個(gè)情況其實(shí)很大可能就是凍存操作和復(fù)蘇操作的細(xì)節(jié)出了差錯(cuò)。而要保證細(xì)胞凍存和復(fù)蘇不受傷害關(guān)鍵密寶是“慢凍快融”。

什么是“慢凍快融”

慢凍：這一步驟主要是為了防止細(xì)胞在冷凍過(guò)程中形成冰晶，從而對(duì)細(xì)胞造成損害。通過(guò)緩慢降低溫度，細(xì)胞可以逐步脫水，減少胞內(nèi)冰晶的形成，從而保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外，加入低溫保護(hù)劑（如DMSO）也能提高胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過(guò)程，進(jìn)一步減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。

速融：在復(fù)蘇過(guò)程中，快速融化是必要的，以防止DMSO在液體狀態(tài)下對(duì)細(xì)胞的毒害作用。快速融化能使細(xì)胞迅速進(jìn)入復(fù)蘇和生長(zhǎng)狀態(tài)，避免由于緩慢融化導(dǎo)致的水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對(duì)細(xì)胞造成損傷。

凍存避坑指南

慢凍：這一步驟主要是為了防止細(xì)胞在冷凍過(guò)程中形成冰晶，從而對(duì)細(xì)胞造成損害。通過(guò)緩慢降低溫度，細(xì)胞可以逐步脫水，減少胞內(nèi)冰晶的形成，從而保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外，加入低溫保護(hù)劑（如DMSO）也能提高胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過(guò)程，進(jìn)一步減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。

速融：在復(fù)蘇過(guò)程中，快速融化是必要的，以防止DMSO在液體狀態(tài)下對(duì)細(xì)胞的毒害作用。快速融化能使細(xì)胞迅速進(jìn)入復(fù)蘇和生長(zhǎng)狀態(tài)，避免由于緩慢融化導(dǎo)致的水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對(duì)細(xì)胞造成損傷。

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復(fù)蘇操作技巧

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復(fù)蘇后注意事項(xiàng)

細(xì)胞復(fù)蘇后只有非常少量細(xì)胞貼壁，是不是需要重新復(fù)蘇？先不要著急丟掉！可以補(bǔ)加血清和細(xì)胞因子，或者每隔 2-3 天換新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò) 2-3 次換液后，大部分細(xì)胞就能看到明顯增殖，此時(shí)再按照正常傳代操作即可。

細(xì)胞復(fù)蘇后剛開(kāi)始已經(jīng)貼壁了狀態(tài)不錯(cuò)，后面第二天開(kāi)始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，這個(gè)情況可能是凍存前細(xì)胞消化過(guò)度，或者凍存中收凍存液殺害細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的情況。