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細(xì)胞污染是我們?cè)谂囵B(yǎng)時(shí)最不愿意遇到卻又或多或少無(wú)法避免的問(wèn)題，今天我們就來(lái)聊一聊細(xì)胞的污染類(lèi)型。

細(xì)胞污染其實(shí)是一個(gè)廣義的說(shuō)法，我們認(rèn)為只要是混入細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境中會(huì)對(duì)細(xì)胞生存有害的成分以及造成我們細(xì)胞培養(yǎng)不純的異物都應(yīng)該被視作污染。

細(xì)胞污染一般不能夠被完全消除，但我們能夠通過(guò)我們的操作等處理減少細(xì)胞污染發(fā)生的頻率和降低細(xì)胞污染后果的嚴(yán)重性。

細(xì)胞污染源按類(lèi)型來(lái)分一般可以分為化學(xué)性污染、物理性污染以及生物性污染。

化學(xué)性污染

化學(xué)性污染的來(lái)源一般為對(duì)細(xì)胞有毒性或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激的化學(xué)物質(zhì)。例如：未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、輔助生長(zhǎng)因子以及各類(lèi)存儲(chǔ)容器等。

此類(lèi)化學(xué)性污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，甚至?xí)?dǎo)致細(xì)胞死亡。

預(yù)防方法

無(wú)論是蒸餾水、雙蒸水還是超純水等，隨著時(shí)間的放置都會(huì)導(dǎo)致純凈度下降，我們需要盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，如果使用存放過(guò)久的溶液，需要根據(jù)性質(zhì)通過(guò)過(guò)濾或高溫滅菌的方式除去其中的雜質(zhì)。

同細(xì)胞系最佳培養(yǎng)條件下對(duì)血清和緩沖液的要求也會(huì)不一致，在適配培養(yǎng)體系時(shí)需要根據(jù)自身不同情況選擇最適宜自身細(xì)胞培養(yǎng)的條件來(lái)選擇培養(yǎng)體系。

血清屬于天然物質(zhì)，其中的成分十分復(fù)雜，不同品牌的血清也因?yàn)樯a(chǎn)工藝以及質(zhì)量也會(huì)各不相同，為了保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，選用同一品牌同一批次血清是最適宜的。

物理性污染

物理性污染主要是通過(guò)影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。例如：培養(yǎng)環(huán)境中的物溫度、放射線(xiàn)、振動(dòng)、輻射(紫外線(xiàn)或熒光)等。

此類(lèi)污染由于細(xì)胞、培養(yǎng)液或其他培養(yǎng)試劑暴露在放射線(xiàn)、輻射或過(guò)冷過(guò)熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制，甚至細(xì)胞死亡。

預(yù)防方法

渦旋振動(dòng)儀、離心機(jī)和搖床等會(huì)引發(fā)機(jī)械振動(dòng)的儀器，建議不要放在二氧化碳培養(yǎng)箱附近；

細(xì)胞培養(yǎng)試劑按儲(chǔ)存要求放置在固定位置，避免周?chē)型凰鼗蛘咂渌派湫晕镔|(zhì)的存在。

培養(yǎng)箱使用過(guò)程中盡量避免頻繁開(kāi)關(guān)門(mén)，以免造成二氧化碳濃度和溫度的長(zhǎng)時(shí)間或大幅度波動(dòng)。

處理細(xì)胞時(shí)，不宜長(zhǎng)時(shí)間讓細(xì)胞處于室溫狀態(tài)，會(huì)影響其生長(zhǎng)。

生物性污染

生物性污染主要為各類(lèi)微生物導(dǎo)致的細(xì)胞污染，不同的微生物污染對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致不同的影響，微生物污染主要可以分為四個(gè)種類(lèi)，為細(xì)菌污染、真菌污染、病毒污染以及支原體污染。

病毒污染和支原體污染對(duì)于細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)部的影響是緩慢并且長(zhǎng)期的；相較來(lái)說(shuō)，細(xì)菌污染和真菌污染就會(huì)在培養(yǎng)容器中迅速增殖，會(huì)在極短時(shí)間內(nèi)就抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，并且產(chǎn)生各類(lèi)有毒有害物質(zhì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

例一：常見(jiàn)細(xì)胞293T在受到大腸桿菌污染

細(xì)胞受到污染后，外觀可見(jiàn)培養(yǎng)液變渾濁，培養(yǎng)液上層會(huì)有漂浮污染物，pH值改變，短時(shí)間就會(huì)由紅變黃。貼壁細(xì)胞會(huì)從貼壁狀態(tài)脫落死亡，生長(zhǎng)停滯。

例二：真菌污染

上圖為常見(jiàn)真菌污染，真菌大多數(shù)為絲狀分支結(jié)構(gòu)，一般有念珠菌、酵母菌、霉菌等。受到真菌污染后第一時(shí)間培養(yǎng)基不會(huì)產(chǎn)生過(guò)多變化，在真菌繁殖到一定數(shù)量后，可肉眼可見(jiàn)培養(yǎng)基表面產(chǎn)生或大或小的菌落，在顯微鏡下觀察可見(jiàn)絮狀菌絲。

預(yù)防方法

預(yù)防細(xì)菌污染一般用雙抗生素；

污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液，此法在污染早期有效。

預(yù)防真菌污染一般是培養(yǎng)體系中加入三抗；

污染后建議丟棄細(xì)胞，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和CO2培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對(duì)用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌。

TIPS:在任何情況下，完全去除細(xì)胞中的微生物污染是及其困難的!過(guò)度使用抗生素可能產(chǎn)生更強(qiáng)抗性的菌株，撤藥后極易復(fù)發(fā)。對(duì)于易重新獲得的細(xì)胞株，建議直接處理培養(yǎng)物，防止污染擴(kuò)散！同時(shí)重新以新批次細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，節(jié)約時(shí)間，減少風(fēng)險(xiǎn)。